mirna的检测方法

这篇文章给大家聊聊关于mirna的检测方法，以及mirna的研究方法对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站哦。

本文目录一览：

• 1、检测mirna的含量用反转录pcr法还是实时荧光pcr法
• 2、如何找出参与特定疾病的基因和microrna
• 3、怎么预测miRNA的下游蛋白
• 4、如何筛选目的基因的miRNA
• 5、如何预测和鉴定miRNA的靶基因
• 6、如何寻找与鉴定miRNA的靶基因?

检测mirna的含量用反转录pcr法还是实时荧光pcr法

1、反转录：使用逆转录酶将提取的总RNA转录成cDNA。miRNA通常是较短的RNA分子，因此需要使用miRNA专用的逆转录试剂盒，具体操作可参照所选试剂盒的说明。miRNA扩增：利用逆转录后得到的cDNA进行miRNA扩增。

2、实时荧光定量PCR是目前确定样品中DNA (或cDNA)拷贝数最敏感、最准确的方法。目前市场上miRNA qPCR检测方法主要有以下两种： 两步法； 三步加尾法。两种方法的主要差别在于qPCR之前的cDNA制备过程（如图）。

3、“qpcr原理是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法；应用于对PCR进程进行实时检测。检测方法：加尾法和颈环法 miRNA很短，用mRNA的反转录方法无法得到足以定量的cDNA。

4、实时PCR(real-time PCR)，属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。real time PCR 的定量使用萤光色素，目前有二种方法。

5、所说的PCR应该就是最常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增。

6、可以吧，不行的话加大样本量，可以用BIOG CFRNA ENRI KIT保证足量提取血浆mirna，然后直接进行PCR检测。

如何找出参与特定疾病的基因和microrna

目前常见的miRNA检测方法包括 Northern Blot、微阵列芯片、微球、实时荧光定量PCR等技术，然而由于以下原因而各具缺陷。首先，由于miRNA本身碱基数过少，使得探针碱基序列的选择受限。

如何在数据库里面找到疾病相关的microrna表达情况：好像还没有这样的数据库。癌症比较复杂，microRNA在癌症中的表达谱差别比较大，各阶段、各类型、甚至个体之间也有差别，结论也不完全统一。

目前比较常用的靶基因预测有：miRanda、TargetScan、PicTar、miRWalk、miRanda、miRDB等，其中在miRWalk中可以查找到已经被研究证实的miRNA的靶基因，也可以查找与某种疾病相关的miRNA等。

第一步想克隆microRNA到表达载体，同时克隆3’-UTR区（包括野生型和突变型）到PGL-3 control 荧光素酶基因下游，双转细胞后，利用荧光素酶报告检测两者是否结合，snp位点是否影响结合。

miRNA芯片的检测原理就是，用Cy-3对总RNA样品进行标记，然后与miRNA芯片杂交，通过扫描芯片上绿光信号的强度，计算出该样品中miRNA的表达量，从而了解该样品中哪些miRNA的表达量出现了异常。

以下是常用的microRNA靶标数据库和资源列表，的暂时没有这种数据库吧，下面第一个基本就够用的了：（1） miRba：众所周知的microRNA基因注释数据库。

怎么预测miRNA的下游蛋白

预测和分析PTC中上述miRNA下游的靶基因，通过上述的表达分析和预后分析，符合筛选要求的只有miR-605-5p和miR-876-两个miRNA。接着，我们使用综合性靶基因预测数据库miRNet，预测这两个miRNA下游的靶基因。

现在有一些预测miRNA靶基因的算法和，的，例如miRtarget等，网上一搜一大把。可以用它们去预测。 但这些算法常常不是很靠谱，因此应多几种算法综合考虑。但这样仍然不是特别靠谱。

到底是简单说明还是详细说明啊……打开targetscan，输入对应物种和mir，然后提交，就能找到对应的靶点。

如何筛选目的基因的miRNA

利用各种生物信息学方法和实验方法来寻找miRNA的靶基因。，鉴定miRNA靶基因的最常用方法是依赖计算机算法，如TargetScan、MiRanda和PicTar。它们预测miRNA种子区的结合。

miRNA靶位点鉴定：目前最为常用的miRNA靶位点鉴定方法是荧光素酶报告基因法。

目前常见的miRNA检测方法包括 Northern Blot、微阵列芯片、微球、实时荧光定量PCR等技术，然而由于以下原因而各具缺陷。首先，由于miRNA本身碱基数过少，使得探针碱基序列的选择受限。

是否是已知的miRNA？如果是已知的miRNA，我建议你到Sanger检索一下序列，然后合成相应探针进行NorthernBlot确证，或者利用RT-PCR克隆相应片段进行测序，等等，具体用什么检测方法要取决于你的课题需要。

如何预测和鉴定miRNA的靶基因

1、如何预测和鉴定miRNA的靶基因miRNAsponge抑制载体，经特异地优化设计，增强吸附能力的同时增加了的结合位点，这样提高了成熟miRNA或siRNA抑制能力，消弱细胞中miRNA或siRNA导致的基因沉默效应，从而进行miRNA或siRNA功能缺失性研究。

2、鉴定miRNA靶基因的最常用方法是依赖计算机算法，如TargetScan、MiRanda和PicTar。它们预测miRNA种子区的结合。

3、用一些预测，例如TargetScan、miRDB等。可以同时使用几个预测，挑选出重叠的靶标，进行靶标验证。一般预测的靶标都是3UTR区有结合位点，因此通常使用双荧光素酶报告实验来证明是否真的是直接靶标。

如何寻找与鉴定miRNA的靶基因?

miRNA靶位点鉴定：目前最为常用的miRNA靶位点鉴定方法是荧光素酶报告基因法。

首先，构建荧光素酶表达载体，将希望鉴定的miRNA靶基因的3’UTR插入荧光素酶基因的3’UTR中，然后将构建好的重组载体转染到细胞中，并改变miRNA的表达水平，最后检测荧光素酶的表达情况，以分析3’UTR中是否含有miRNA的靶位点。

用一些预测，例如TargetScan、miRDB等。可以同时使用几个预测，挑选出重叠的靶标，进行靶标验证。一般预测的靶标都是3UTR区有结合位点，因此通常使用双荧光素酶报告实验来证明是否真的是直接靶标。

-UTR，通过抑制翻译起始来调控基因表达。据此可以设计，你过表达这个miRNA，那么它的靶基因应该是mRNA不怎么变，但翻译中mRNA明显下调。符合这一特征的即很有可能是miRNA的直接靶点。再结合断，一般就可以很精准了。

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